Méthode d'isolement

Diagnostic bactériologique des infections à Campylobacter dans les selles

Les infections à Campylobacter constituent la première cause d'infection intestinale bactérienne, dans les pays développés comme dans les pays en développement.
Il existe de nombreuses techniques de recherche de ces bactéries. La méthode présentée ici n'a pas la prétention d'être la meilleure mais c'est celle qui nous donne satisfaction depuis 20 ans.

Matériel nécessaire

- milieux sélectifs pour Campylobacter : différents milieux ont été proposés, plusieurs sont disponibles auprès des fournisseurs français et sont satisfaisants. Le point clé est la fraîcheur du milieu. Pour cette raison, les milieux pré-coulés ne sont pas idéaux sauf en cas de débit important. Sinon, privilégier les milieux préparés extemporanément.
- jarre pour culture de bactéries anaérobies avec sachet générateur de gaz pour bactéries microaérobies. Alternative : sachets d'incubation individuels.
- étude à 37°C : bien que la température optimale de croissance des Campylobacter les plus fréquemment isolés soit de 42°C, il est préférable d'utiliser 37°C.

Méthode

- Selles récemment émises ou gardées à 4°C. Si un écouvillon est utilisé, il est nécessaire d'utiliser un milieu de transport.
- Ensemencement du milieu sélectif à partir d'une suspension dense de selles dans du sérum physiologique.
- Incubation rapide en jarre ou sachet, en atmosphère microaérobie.
- Observation après 24 et 48 heures.
- En cas de colonie suspecte (lisse, brillante), examen microscopique à l'état frais et après coloration de gram, réalisation d'un test à l'oxydase et à la catalase.
La présence de petites bactéries incurvées, mobiles, gram négatif, oxydase et catalase positif dans les conditions de culture précitées indiquent la présence d'une bactérie du genre Campylobacter.
- Pour le diagnostic d'espèce, il faut réaliser des tests biochimiques, de croissance et de sensibilité, ou utiliser une galerie Api Campy (bioMérieux).

Conditions d'envoi

- Envoi de la souche : repiquer une suspension dense des colonies suspectes sur le même milieu sélectif et incuber à 37°C en atmosphère microaérobie. La totalité de la pousse sera ensuite introduite dans un milieu pour conservation des souches bactériennes de BioRad et adressée aussitôt sans incubation.
Attention, la viabilité des Campylobacter, notamment lors de la subculture, est limitée. Utiliser des cultures très jeunes pour l'envoi et/ou les tests de diagnostic d'espèce sinon les bactéries évoluent vers une forme coccoïde non viable.

Du fait des conditions draconiennes requises pour l'envoi des souches, leur transport est devenu onéreux. Pour cette raison, l'Institut de Veille Sanitaire a décidé de prendre en charge ces frais à titre expérimental dans le cadre de notre réseau de surveillance pour l'étendre ensuite aux autres réseaux.

Ceci correspond à un effort important pour libérer les laboratoires de ce type de contraintes.

Retour d'information

Une fois la bactérie identifiée et sa sensibilité aux antibiotiques connu, les résultats sont envoyés aux laboratoires sur une base hebdomadaire. En cas d'urgence, un résultat peut être donné au téléphone.